食道平散为中药复方制剂,主要由人参、西洋参、全蝎、蜈蚣、细辛、三七等十余种中药组成,具有益气破瘀,解毒散结等功效。食道平散用于中晚期食管癌而致食管狭窄梗阻,吞咽困难,疼痛等症。食道平散原质量标准用比色法测定人参皂苷Re的含量,其有费时,重现性差,精密度低等不足。我们参照相关文献,采用高效液相色谱法(HPLE)对食道平散制剂中人参、西洋参、三七所含成分人参皂苷Rg1和Re进行了测定,该方法简便、快速而准确,重现性好,能更好地控制该制剂的质量。
1 仪器与试药
1.1 仪器:岛津LC-10ATVP高效液相色谱仪,SPD-10AVP紫外检测器。色谱工作站。
1.2 试药:乙腈为色谱纯(美国TEDIA),其它试剂均为分析纯。人参皂苷Rgl和Re对照品(批号0703-200120和0754-9809,中国药品生物制品检定所提供.供含量测定用)。食道平散由西安金龟寿药业有限公司提供。
2 方法与结果
2.1 色谱条件:色谱柱:岛津VP-ODS色谱柱(150 mm×4.6mm,5 urm);流动相:乙腈5g/L:磷酸溶液(19.5:80.5);检测波长203 nm;柱温:室温;流速:1.3 ml/min。理论塔板数按人参皂苷Rgl计算应不低于5000。
2.2 溶液的制备
2.2.1 对照品溶液的制备精密称取人参皂苷Rg1、Re对照品适量,加甲醇制成每1 m1分别含0.5 mg、0.2 mg的溶液,即得。
2.2.2 供试品溶液的制备 取食道平散2.0g,精密称定,置索氏提取器中。加乙醚适量,加热回流4小时,取出滤纸筒,挥干乙醚,连同滤纸置具塞三角瓶中,加正丁醇饱和水1ml使湿润,精密加入水饱和的正丁醇50 ml。称定重量,超声处理30分种,放置过液,再超声处理30分钟,放冷,称定重量,用水饱和的正丁醇补足减失的重量,摇匀。静置,取上清液滤过,精密吸取续滤液25ml,加氨试液洗涤2次,每次20 rnl,弃去洗液,正丁醇液置水浴上蒸干,残渣加甲醇溶解,并定量转移至5 ml量瓶中,加甲醇至刻度,摇匀,以0.45um的微孔滤膜滤过,取续滤液,即得。
2.2.3 空白对照溶液的制备:按处方比例工艺制得不含人参、西洋参、三七的阴性样品,按供试品液的制备方法制备溶液。分别取上述三种溶液10 注入高效液相色谱仪,按色谱条件测定吸收峰面积,其HPLC图谱分别见图1、图2、图3。(略)
2.3 线性关系考察:精密称取人参皂苷Rg1、Re对照品25.60mg、10.85 mg,加甲醇稀释至5 ml,分别吸取上述溶液0.05、0.1、0.2、0.5、l.0 ml, 加甲醇定容于2 rnl容量瓶中分别吸取10ul。按上述色谱条件测定峰面积。以峰面积积分值为纵坐标,人参皂苷Rg1、Re的量为横坐标,绘制标准曲线,人参皂苷Rg1在1.28~51.6 ug范围内有良好的线性关系,回归方程为Y=82668X-1689,r =0.9999;人参皂苷Re在0.54~21.7 g范围内有良好的线性关系,回归方程为Y=72145X-2544,r=0.9999。
2.4 精密度试验:精密吸取上述食道平散对照品溶液10 ul,重复进样5次,按上述色谱条件测定峰面积,结果人参皂苷Rg1和Re的峰面积中RSD分别为0.99%和2.0%。
2.5 重现性试验:取同一批号食道平散样品5份,按上述色谱条件操作,测得人参皂苷Rgl的平均含量为5.089 mg/g,RSD=I.67%;人参皂苷Re的平均含量为1.321 mg/g,RSD=1.69%。
2.6 稳定性试验:取同一食道平散供试品溶液,按上述色谱条件,分别于0、1、4、8、24小时测定峰面积积分值,结果表明。食道平散供试品溶液液在24内基本稳定.其人参皂苷Rgl和Re的RSD分别为1.39%和2.52%。
2.7 回收率试验:精密称取已知含量的食道平散供试品适量,精密加入一定量的对照品,按供试品溶液制备的方法,制备待测液,按上述色谱条件操作。测定峰面积,计算舍量和回收率,结果见表l、表2。(略)
2.8 样品测定:精密称取样品,按上述色谱条件操作,测量结果见表3。(略)
3 讨论
在食道平散供试品溶液制备考察时,对提取溶剂、超声次数和时间等均进行了比较实验,最终确定为减少脂溶性杂质干扰,选择乙醚回流脱脂:因西洋参、三七药材组织坚实具角质化,选择水饱和的正丁醇超声提取2次,为了避免黄酮类成分的干扰而采用碱洗的净化方法。经实验表明,食道平散该检验人参皂苷的方法简便、有效,能满足含量测定的要求。