血栓心脉宁胶囊是纯中药制剂,主要由川芎、丹参、水蛭、麝香、牛黄、毛冬青、槐花、人参茎叶皂苷、冰片、蟾蜍等10种中药材组成。具有芳香开窍、活血散瘀功能,主治脑血栓、冠心病心绞痛属于血瘀证者。为证实其化瘀通脉作用,本文通过观察急性血瘀模型大鼠血小板聚集及血液流变学的变化,评价血栓心脉宁胶囊的活血化瘀作用,为其临床治疗缺血性心、脑血管疾病提供科学依据。
1材料与方法
1.1动物清洁级Wistar大鼠,雌雄各半,200~220 g,合格证号SCXK-(吉) 2007-0003,由吉林大学实验动物中心提供。
1.2实验药品及仪器血栓心脉宁胶囊,实验时以0.5%羧甲基纤维素钠配制成所需浓度;血栓素B2(TXB2)及6-酮-前列腺素F1α(6-keto-PGF1α)试剂盒,北京美迪科生物技术有限公司提供,批号:20090825;0.1%盐酸肾上腺素注射液(1 mg/ml),北京永康制药厂出品,批号:2009103029。LBY-N6A旋转式血液黏度计及LBY-NJ2型血小板聚集仪:北京普利生集团产品;XN3型红细胞电泳计时器:上海第一医学院产品。
1.3实验方法50只大鼠随机分为正常对照组、血瘀模型组及血栓心脉宁胶囊200、400、800 mg/kg 5组,每组10只。药物组每日灌胃给药1次,连续 6 d,正常对照组及血瘀模型组给予等体积0.5%羧甲基纤维素钠2 ml/kg。除正常对照组大鼠外,其他各组大鼠均皮下注射0.1%肾上腺素0.8ml/kg,2 h后将大鼠浸入冰水中5 min,2 h后再按0.1%肾上腺素0.6 ml/kg注射一次以复制急性血瘀模型〔2〕。大鼠复制急性血瘀模型后禁食不禁水12 h,第7天给药后1 h,每组动物以戊巴比妥钠30 mg/kg腹腔注射麻醉,腹主动脉取血,肝素抗凝。从加有抗凝剂的 4ml全血中取出 1 ml加入LBY-N6A旋转式血液黏度计,分别测定全血低切(10/s)、中切(40/s)及高切(160/s)黏度,余下3 ml全血以3 000 r/min离心10 min,取上层血浆 1ml加入黏度计测定血浆黏度(160/s);剩余血浆用放免法〔3〕测定血浆6-Keto-PGF1α(代表PGI2)及TXB2(代表TXA2),以微量热沉淀法〔4〕测定血浆纤维蛋白原浓度(Fib);腹主动脉取血1.5 ml,109 mmol/L枸橼酸钠抗凝。1 500 r/min离心5min,取上层富血小板血浆(PRP),余血3 000 r/min离心10 min,取贫血小板血浆(PPP),用PPP调PRP至血小板数6×1011/L~7×1011/L。以LBY-NJ2型 血小板聚集仪按比浊法〔5〕测定血小板聚集活性 ,求出1、3、5 min的血小板聚集率(PAG)及最大血小板聚集率(MPAG);以微量毛细管法〔6〕测定红细胞压积(Hct);通过XN3型红细胞电泳计时器测定红细胞电泳时间(RCET);测血沉(ESR);进一步推算出红细胞聚集指数(EAI)及红细胞刚性指数(ERI)。
1.4统计学方法应用SPSS13.0统计软件进行处理,实验数据以x±s表示,多组间对比采用方差分析,两组间比较采用t检验进行统计分析。
2结果
2.1对急性血瘀模型大鼠全血黏度及血浆黏度的影响与正常对照组比较,血瘀模型组大鼠全血低、中、高切黏度及血浆黏度均明显增加(P<0.05或P<0.01)。与血瘀模型组比较,血栓心脉宁胶囊400、800 mg/kg组均可使全血低、中、高切及血浆黏度明显降低(P<0.05或P<0.01),血栓心脉宁胶囊200 mg/kg组对全血低、中、高切黏度及血浆黏度均无明显影响(P>0.05)。
2.2对急性血瘀模型大鼠血小板聚集功能的影响与正常对照组比较,血瘀模型组大鼠1、3、5 min PAG及MPAG均明显升高(P<0.05或P<0.01)。与血瘀模型组比较,血栓心脉宁胶囊 400、800 mg/kg组均可使1、3、5 min PAG及MPAG明显降低(P<0.05或P<0.01),血栓心脉宁胶囊 200 mg/kg组对1、3、5 min PAG及MPAG均无明显影响(P>0.05)。
2.3对急性血瘀模型大鼠血液流变学的影响与正常对照组比较,血瘀模型组大鼠血浆Fib、ESR、Hct、EAI及ERI均明显增加,而RCET明显延长(P<0.05或P<0.01)。与血瘀模型组比较,血栓心脉宁胶囊 200、400、800mg/kg对上述血液流变学的异常变化,除RCET外,均有明显改善作用(P<0.05或P<0.01)。
2.4对急性血瘀模型大鼠血浆PGI2及TXA2的影响与正常对照组比较,血瘀模型组大鼠血浆TXA2含量明显增加,PGI2含量及PGI2/TXA2比值明显降低(P<0.05或P<0.01)。与血瘀模型组比较,血栓心脉宁胶囊200、400、800 mg/kg均可使急性血瘀模型大鼠血浆TXA2含量明显降低,PGI2含量及PGI2/TXA2比值明显增高(P<0.05或P<0.01)。
本实验给大鼠皮下注射大量的肾上腺素模拟暴怒时机体状态,以冰水浸泡模拟寒邪侵入,建立大鼠气滞血瘀模型,观察血栓心脉宁胶囊对气滞血瘀模型大鼠血小板功能及血液流变学的影响,符合中医活血化瘀药物的治疗原则。血液流变学是研究循环血液的流动性、变形性、凝固性、黏弹性以及心血管黏滞性的科学。血液流变学有很多的检验项目,最常见的为全血高、中、低切三种黏度、血浆黏度、Fib、ESR、Hct、ERI等。当人体患
心脑血管系统疾病时,血液的流变性发生异常,引起全身或局部循环和微循环障碍。血液黏度是衡量血液流变性的指标,黏度越高,流动性越小,越易堵塞血管形成血栓。血液黏度主要由Hct,血浆黏度,红细胞聚集性及红细胞变形性等因素决定。本实验结果显示,血栓心脉宁胶囊可使急性血瘀模型大鼠全血黏度、血浆黏度、血浆Fib浓度、ESR、Hct、ERI及EAI均明显降低,说明其不仅能抑制红细胞聚集,而且能降低红细胞的脆性,增强其变形性。